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    【通蔚生物】:分享怎么用流式解決細胞周期檢測

    細胞周期是指從一次細胞分裂形成子細胞開始到下一次細胞分裂形成子細胞為止所經歷的過程,可反映細胞增殖的速度。
    細胞周期由多個階段組成,通常包括G1期(細胞大小增加)、S期(DNA合成和復制)、G2期(細胞進一步生長),以及M期(有絲分裂和細胞分裂)、GO期(細胞靜息休眠)。在細胞周期的不同時期,細胞核內的DNA含量存在差異。使用染料對DNA進行染色(如PI染料),可根據其熒光強度判斷細胞所處時期——DNA含量多,熒光強度高,DNA含量少,熒光強度低。檢測過程中,常遇見可以當天檢測的活細胞樣本,以及當天無法檢測的活細胞樣本,通蔚自主研發的細胞周期檢測產品就派上大用處了,既能檢測活細胞又能檢測固定細胞。

    活細胞/固定細胞周期檢測檢測步驟已為大家整理好,如下:
    流式細胞周期檢測中有許多需要注意的事項,來看制備單細胞懸液,操作應輕柔,減少碎片,但消化要充分而不過度,保證細胞不粘連、不破裂,染色要充分;最低速度上機檢測,降低CV,避免儀器把相鄰細胞當做一個細胞;排除粘連體,避免細胞粘黏檢測的DNA含量為非2倍體,導致實驗結果不準確PI的坐標選線性,線性更能體現DNA含量的倍數關系;利用RNase消除細胞周期檢測中RNA的影響,PI是一種插入性核酸熒光染料,能選擇性地嵌入核酸DNA雙鏈螺旋的堿基之間并發出熒光,但也可以插RNA的雙鏈區,非 DNA特異性,需加入RNase消除RNA的影響;進行DNA染色時不要洗滌,不同于蛋白質染料和細胞之間的牢固結合,DNA與染料的結合,是一種結合態與游離態之間松散的平衡,洗滌步驟會造成染料丟失,降低核酸的特異性熒光,造成測量值降低;實驗放最后做,由于PI具有黏性,通常周期實驗放在最后做,否則需要深度清洗后,再進行其它實驗。
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